Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
TORC2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402481-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TORC2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TORC2 Double Nickase Plasmid (h) e il TORC2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRTC2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TORC2 Antibody (G-4): sc-166445
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TORC2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TORC2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il CRTC2 (TORC2) umano è un coattivatore trascrizionale regolato da CREB che integra segnali dipendenti da cAMP e dal calcio per coordinare l’espressione genica in risposta agli stimoli. In seguito a defosforilazione e traslocazione nel nucleo, TORC2 potenzia programmi trascrizionali guidati da CREB coinvolti nella gluconeogenesi epatica, nell’omeostasi dei lipidi e dell’energia e nelle risposte adattative allo stato nutrizionale. L’attività di CRTC2 è modulata da chinasi come AMPK e le SIK e interseca la segnalazione PKA e le reti trascrizionali metaboliche. Una segnalazione di CRTC2 deregolata è stata collegata in letteratura a fenotipi metabolici, tra cui resistenza all’insulina e alterazioni della gestione del glucosio, supportandone l’uso come nodo meccanicistico negli studi delle vie endocrine e metaboliche.
TORC2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRTC2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRTC2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRTC2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRTC2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.