TNIK Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401523-LAC

La TNIK umana (TRAF2 and NCK-interacting kinase) è una chinasi serina/treonina che integra segnali provenienti da piccole GTPasi e proteine adattatrici per regolare la dinamica del citoscheletro, il traffico vescicolare e i programmi trascrizionali. TNIK svolge ruoli ben caratterizzati nella segnalazione Wnt/β-catenina, inclusa la modulazione della trascrizione dipendente da TCF/LEF, e contribuisce a vie che governano la polarità cellulare, la migrazione e lo sviluppo neuronale. In contesti immunitari ed epiteliali, TNIK può intersecarsi con reti di segnalazione dello stress e dell’infiammazione attraverso interazioni proteina–proteina e l’attività chinasica. Un’espressione o una segnalazione di TNIK deregolate sono state associate a stati oncogenici della via Wnt e a fenotipi neuroevolutivi, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici del controllo delle vie di segnalazione e del comportamento cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale TNIK (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TNIK in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TNIK (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TNIK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TNIK. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TNIK e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.