TMEM38B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-412461-LAC

TMEM38B codifica una proteina di membrana multipasso del reticolo endoplasmatico che forma un canale cationico implicato nella regolazione della gestione del calcio intracellulare. Modulando il flusso di Ca2+ e mettendo in connessione le dinamiche del calcio nel RE con i segnali di eccitazione–contrazione e di adattamento allo stress, TMEM38B può influenzare processi quali l’omeostasi del calcio, la funzione del RE e i programmi trascrizionali a valle. L’alterazione genetica di TMEM38B è stata associata a fenotipi scheletrici, incluse forme di osteogenesi imperfetta, evidenziandone la rilevanza per la biologia dell’osso e l’integrità del tessuto connettivo. Queste proprietà rendono TMEM38B un bersaglio utile per studiare la segnalazione dipendente dal calcio, le vie correlate al RE e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM38B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TMEM38B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM38B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TMEM38B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TMEM38B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TMEM38B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.