TMEM132A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412402-ACT

TMEM132A (proteina transmembrana 132A) è una proteina umana di membrana a singolo passaggio, implicata nella comunicazione cellula–cellula e nella regolazione della segnalazione legata all’adesione sulla superficie cellulare. L’espressione di TMEM132A è stata collegata alla biologia neuronale e gliale, incluse vie che influenzano l’organizzazione del citoscheletro e i processi di segnalazione associati alla membrana che modellano morfologia e connettività cellulari. Studi genetici e di espressione hanno associato TMEM132A a fenotipi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, sostenendone la rilevanza per indagare i meccanismi della funzione neuronale e dell’organizzazione dei circuiti. In quanto fattore associato alla membrana, TMEM132A è anche utile per esplorare come segnali extracellulari vengano tradotti in risposte intracellulari che influenzano la differenziazione e la risposta allo stress.

TMEM132A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TMEM132A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TMEM132A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TMEM132A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TMEM132A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TMEM132A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TMEM132A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TMEM132A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TMEM132A nelle cellule tumorali con espressione di TMEM132A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.