Tie-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400295-ACT

TEK codifica il recettore tirosin-chinasico endoteliale Tie-2, un regolatore chiave dello sviluppo e del mantenimento vascolare che integra la segnalazione delle angiopoietine per controllare la sopravvivenza, la migrazione e l’integrità della barriera delle cellule endoteliali. L’attività di Tie-2 coordina a valle le vie PI3K/AKT e MAPK e dialoga con i programmi angiogenici guidati da VEGF per modellare il rimodellamento dei vasi e il mantenimento della quiescenza. Una segnalazione TEK/Tie-2 disregolata è stata associata ad angiogenesi patologica, malformazioni vascolari, disfunzione endoteliale legata all’infiammazione e rimodellamento vascolare del microambiente tumorale. Di conseguenza, TEK è ampiamente studiato nella biologia endoteliale, nella permeabilità vascolare e nelle reti di segnalazione stromale rilevanti per la ricerca cardiovascolare e oncologica.

Tie-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TEK senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tie-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TEK nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TEK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tie-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TEK nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tie-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tie-2 nelle cellule tumorali con espressione di TEK silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.