TET2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400545-ACT

TET2 umano codifica una diossigenasi dipendente da Fe(II)/2-ossoglutarato che ossida la 5-metilcitosina a 5-idrossimetilcitosina e a ulteriori derivati, promuovendo la demetilazione del DNA sia attiva sia passiva. Attraverso la regolazione degli stati di metilazione di enhancer e promotori, TET2 modella programmi trascrizionali che controllano la differenziazione ematopoietica, l’autorinnovamento e la specificazione delle linee cellulari immunitarie. La funzione di TET2 è integrata con vie epigenetiche che coinvolgono modificatori della cromatina e processi di riparazione del DNA associati alla gestione delle basi di citosina ossidata, influenzando l’accessibilità a livello dell’intero genoma e la stabilità dell’espressione genica. La deregolazione o mutazione di TET2 è frequentemente associata all’ematopoiesi clonale e alla biologia delle neoplasie mieloidi, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici del rimodellamento epigenetico in sistemi cellulari rilevanti per la malattia.

TET2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TET2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TET2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TET2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TET2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TET2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TET2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TET2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TET2 nelle cellule tumorali con espressione di TET2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.