TEF-4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402319-ACT

Il gene umano **TEAD2** codifica il fattore di trascrizione **TEF-4**, una proteina legante il DNA con dominio TEA/ATTS che si associa a YAP/TAZ per controllare programmi genici che regolano proliferazione, sopravvivenza e specificazione di linea. TEF-4 integra segnali della via Hippo e coordina l’attività di enhancer e promotori per regolare la progressione del ciclo cellulare, la dinamica del citoscheletro e la plasticità epitelio–mesenchimale. Un’attività deregolata di TEAD2/TEF-4 è stata collegata a un controllo anomalo della crescita e a stati di differenziazione alterati osservati in molteplici contesti tumorali e in disturbi dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per analizzare le dipendenze dei circuiti trascrizionali. In quanto effettore di via, TEF-4 offre un punto di accesso maneggevole per studiare come segnali meccanici e chinasi a monte vengano convertiti in transizioni di stato cellulare.

TEF-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TEAD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TEF-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TEAD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TEAD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TEF-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TEAD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TEF-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TEF-4 nelle cellule tumorali con espressione di TEAD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.