TCEA3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408517-ACT

TCEA3 codifica il fattore di elongazione della trascrizione A3, una proteina della famiglia TFIIS che si associa alla RNA polimerasi II per stimolare il clivaggio del trascritto e recuperare i complessi di elongazione retrocessi (backtracked), sostenendo una sintesi produttiva dell’mRNA. Modulando la fedeltà dell’elongazione e la ripartenza, TCEA3 contribuisce all’omeostasi trascrizionale globale e influenza programmi cellulari legati a proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. La deregolazione del controllo dell’elongazione mediata da Pol II e dell’attività TFIIS è stata implicata in difetti di stabilità del genoma e in stati trascrizionali alterati osservati in diversi contesti patologici, inclusi il cancro e i disturbi dello sviluppo. In quanto regolatore trascrizionale, TCEA3 è un bersaglio utile per studiare come i fattori di elongazione modulino le reti di espressione genica e gli output delle vie di segnalazione nelle cellule umane.

TCEA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TCEA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TCEA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TCEA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TCEA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TCEA3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TCEA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TCEA3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TCEA3 nelle cellule tumorali con espressione di TCEA3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.