TACE/ADAM17 Plasmide Double Nickase (m): sc-418985-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TACE/ADAM17 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TACE/ADAM17 Double Nickase Plasmid (m) e il TACE/ADAM17 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Adam17. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TACE/ADAM17 Plasmide Double Nickase (m) | sc-418985-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene Adam17 del topo codifica la metalloproteasi transmembrana TACE/ADAM17, una principale “sheddase” che rilascia ectodomini solubili di citochine, fattori di crescita e recettori. Scindendo substrati quali pro‑TNF, ligandi di EGFR e alcune molecole di adesione selezionate, ADAM17 collega la segnalazione infiammatoria con le vie associate a EGFR/MAPK e NF‑κB, modellando la comunicazione cellulare, la proliferazione e le risposte allo stress. La sua attività si interseca con la proteolisi intramembrana regolata e con i processi di traffico di membrana che controllano la disponibilità dei recettori e l’ampiezza della segnalazione a valle. Un’alterata shedding dipendente da ADAM17 è stata implicata in modelli sperimentali di malattie infiammatorie, rimodellamento tissutale e reti di segnalazione correlate al cancro, motivando studi meccanicistici in sistemi immunitari ed epiteliali.
TACE/ADAM17 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Adam17 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Adam17. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Adam17. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Adam17 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.