Stat3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400027-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Stat3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Stat3 Double Nickase Plasmid (h) e il Stat3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira STAT3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Stat3 Antibody (F-2): sc-8019
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Stat3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400027-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Stat3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400027-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STAT3 codifica Stat3, un fattore di trascrizione citoplasmatico latente attivato a valle dei recettori per citochine e fattori di crescita, in particolare tramite le chinasi JAK. Dopo la fosforilazione, Stat3 dimerizza e trasloca nel nucleo per regolare programmi genici che controllano proliferazione, sopravvivenza, differenziamento, infiammazione ed evasione immunitaria, con cross-talk con le vie di segnalazione MAPK e PI3K–AKT. L’attività di STAT3 è frequentemente deregolata nella biologia dei tumori, negli stati infiammatori cronici e nei disturbi immunomediati, ed è ampiamente utilizzata come nodo per studiare il controllo trascrizionale della segnalazione mediata da citochine. Nelle cellule umane, gli output dipendenti da STAT3 includono le risposte di fase acuta, la polarizzazione delle cellule T e reti trascrizionali associate alla transizione epitelio-mesenchimale.
Stat3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus STAT3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di STAT3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di STAT3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con STAT3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.