SR-B1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400990-ACT

SCARB1 codifica il recettore scavenger di classe B tipo 1 (SR-B1), un recettore di superficie cellulare multi-ligando che media l’assorbimento selettivo degli esteri del colesterolo dalle HDL e coordina il trasporto bidirezionale dei lipidi. SR-B1 contribuisce a regolare l’omeostasi del colesterolo cellulare e la composizione delle membrane, influenzando la produzione steroidea, la dinamica delle gocce lipidiche e il metabolismo delle lipoproteine negli epatociti e nei tessuti steroido-genici. Attraverso queste funzioni, SR-B1 interagisce con vie che controllano la gestione dei lipidi e la segnalazione infiammatoria, inclusa la modulazione delle risposte allo stress ossidativo e dell’attività dei recettori dell’immunità innata. Un’alterazione dell’attività di SCARB1/SR-B1 è stata associata a dislipidemie e a fenotipi correlati all’aterosclerosi ed è frequentemente oggetto di studio per il suo ruolo nel rimodellamento metabolico e nella segnalazione lipidica rilevante per la malattia nelle cellule umane.

SR-B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SCARB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SR-B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SCARB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SCARB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SR-B1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SCARB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SR-B1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SR-B1 nelle cellule tumorali con espressione di SCARB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.