SPA-L3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411666-LAC

SIPA1L3 codifica la proteina 3 tipo 1 associata alla proliferazione indotta da segnali (SPA-L3), uno scaffold associato alla via Rap/Ras che collega la segnalazione mediata da piccole GTPasi ai programmi di rimodellamento del citoscheletro e di adesione cellulare. Grazie ai suoi domini di interazione modulari, SPA-L3 è implicata nel coordinare la dinamica dell’actina, il traffico di membrana e l’organizzazione delle giunzioni, processi che determinano la polarità cellulare e l’architettura tissutale. La disregolazione della segnalazione Rap/Ras e l’alterato controllo del citoscheletro sono caratteristiche ricorrenti nella progressione tumorale e nei fenotipi invasivi, rendendo SIPA1L3 un nodo utile per studiare l’accoppiamento tra segnalazione e struttura. Nel sistema nervoso, quadri di segnalazione correlati supportano la crescita dei neuriti e l’organizzazione sinaptica, offrendo ulteriore contesto per indagare meccanismi dello sviluppo e neurobiologici.

Le particelle di attivazione lentivirale SPA-L3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SIPA1L3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SPA-L3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SIPA1L3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SPA-L3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SIPA1L3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.