Sox2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400050-ACT

SOX2 codifica il fattore di trascrizione Sox2, un regolatore centrale della pluripotenza e dell’autorinnovamento che coopera con OCT4 e NANOG per mantenere l’identità delle cellule staminali, limitando al contempo l’impegno verso specifiche linee di differenziamento. Nelle cellule umane, Sox2 controlla programmi genici coinvolti nel rimodellamento della cromatina, nella specificazione dell’ectoderma neurale e in reti di segnalazione dello sviluppo che includono WNT, SHH, BMP, FGF e Notch. Un’espressione deregolata di SOX2 è associata a stati di differenziamento alterati, proliferazione aberrante e plasticità cellulare, ed è stata riportata in contesti di anomalie del neurosviluppo e di biologia tumorale. Queste caratteristiche rendono SOX2 un nodo ampiamente utilizzato per lo studio dei circuiti trascrizionali, della regolazione epigenetica e delle transizioni di destino cellulare.

Sox2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox2 nelle cellule tumorali con espressione di SOX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.