Sox-4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401217-ACT

SOX4 kodiert den Transkriptionsfaktor Sox-4, ein DNA-bindendes Protein mit HMG-Box (High-Mobility-Group), das die Festlegung von Zelllinien, Entscheidungen über Zellschicksale und Entwicklungsprogramme in mehreren Geweben reguliert. Sox-4 ist in Signalnetzwerke wie Wnt/β-Catenin, TGF-β/SMAD und Notch eingebunden und steuert dadurch transkriptionelle Schaltkreise, die Proliferation, Differenzierung und Überleben kontrollieren. Eine fehlregulierte SOX4-Expression wurde in zahlreichen Tumorkontexten beschrieben und wird häufig im Zusammenhang mit epithelial–mesenchymaler Transition, stammzellähnlichen Zellzuständen und invasionsassoziierter Genexpression untersucht. In immunologischen und neuroentwicklungsbezogenen Systemen trägt Sox-4 ebenfalls zu Differenzierungsverläufen bei und ist damit relevant für mechanistische Studien zur Transkriptionsregulation und zellulären Plastizität.

Sox-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SOX4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sox-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SOX4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SOX4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sox-4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SOX4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sox-4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sox-4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SOX4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.