Sos 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401135-ACT

SOS1 umano codifica Sos1, un fattore di scambio di nucleotidi guaninici (GEF) per Ras che collega i recettori tirosin-chinasici attivati e le proteine adattatrici, come GRB2, all’attivazione di RAS promuovendo lo scambio da GDP a GTP. Attraverso questo ruolo, propaga il flusso del segnale nella cascata RAF–MEK–ERK (MAPK) e si interfaccia con output di segnalazione correlati a PI3K che regolano proliferazione, differenziamento, motilità e dinamica del citoscheletro. L’attività di SOS1 è strettamente controllata dal reclutamento alla membrana, dal legame allosterico a RAS e dalla fosforilazione di feedback, rendendola un nodo chiave nelle reti sensibili ai fattori di crescita. Una segnalazione SOS1/RAS-MAPK deregolata è rilevante per la biologia della segnalazione oncogenica e per i disturbi dello sviluppo, supportando studi meccanicistici sul riassetto delle vie di segnalazione, sul controllo dell’ampiezza del segnale e su risposte trascrizionali specifiche del contesto.

Sos 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sos 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sos 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sos 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sos 1 nelle cellule tumorali con espressione di SOS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.