Smad2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400475-NIC

Il gene umano **SMAD2** codifica per **Smad2**, uno SMAD regolato dal recettore che trasduce i segnali di **TGF-β** e **activina/NODAL** dai recettori di tipo I al nucleo, dove coopera con **SMAD4** per modulare programmi trascrizionali che controllano la regolazione del ciclo cellulare, la differenziazione, il rimodellamento della matrice extracellulare e la segnalazione immunitaria. L’attività di Smad2 è modellata dalla fosforilazione del C-terminale, dallo shuttle nucleo-citoplasma e dal crosstalk con le vie **MAPK** e **PI3K/AKT**, integrando segnali di crescita e di stress dipendenti dal contesto. Una segnalazione di **SMAD2** deregolata è stata implicata in alterazioni delle dinamiche epitelio–mesenchimali, nel rimodellamento fibrotico, in stati trascrizionali associati all’infiammazione e nella biologia tumorale, attraverso la perturbazione degli output canonici della via del TGF-β. In quanto nodo centrale nella segnalazione della superfamiglia del TGF-β, SMAD2 è spesso studiato per analizzare l’architettura della via, l’assemblaggio dei complessi trascrizionali e le risposte delle reti geniche a valle.

Smad2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMAD2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMAD2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMAD2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMAD2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.