SLC35A2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408155-ACT

SLC35A2 codifica un trasportatore di UDP-galattosio localizzato nell’apparato di Golgi, che importa galattosio attivato dal citosol nel lume del Golgi per sostenere la galattosilazione di glicani N- e O-legati e dei glicolipidi. Controllando la disponibilità di zuccheri nucleotidici, SLC35A2 influenza la maturazione delle glicoproteine, la funzione dei recettori di superficie, il traffico vescicolare e l’omeostasi della via secretoria. Alterazioni dell’attività di SLC35A2 sono state associate a difetti nella glicosilazione delle proteine, con effetti a valle sulla segnalazione cellulare e sullo sviluppo dei tessuti, ed è spesso studiato nel contesto dei disordini congeniti della glicosilazione e della biologia delle mutazioni a mosaico. Questo gene è quindi rilevante per la ricerca su meccanismi dipendenti dai glicani che modellano l’adesione, il riconoscimento immunitario e la stabilità delle proteine di membrana.

SLC35A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC35A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLC35A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC35A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC35A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLC35A2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC35A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLC35A2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLC35A2 nelle cellule tumorali con espressione di SLC35A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.