SLAMF6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409009-ACT

SLAMF6 (membro 6 della famiglia delle molecole di attivazione linfocitaria di segnalazione, noto anche come NTB-A/CD352) è un recettore della superfamiglia delle immunoglobuline espresso prevalentemente su cellule T, cellule NK e su sottopopolazioni di cellule B, dove funge da co-recettore omofilico che modula le soglie di attivazione e i programmi effettrici. Attraverso la segnalazione mediata da adattatori associati a SLAM, incluse vie dipendenti da SAP/SH2D1A, SLAMF6 influenza eventi prossimali di fosforilazione su tirosina e gli output trascrizionali a valle che plasmano la produzione di citochine, la citotossicità e il cross-talk tra linfociti. Alterazioni della segnalazione di SLAMF6 sono state collegate a una disregolazione dell’omeostasi immunitaria e a patologie immunomediate, e vengono frequentemente studiate in contesti di infiammazione cronica, infezioni e immunologia dei tumori. In quanto modulatore di superficie, simile a un checkpoint, della funzione linfocitaria, SLAMF6 è ampiamente utilizzato come nodo meccanicistico per studiare la co-stimolazione recettoriale, gli stati associati all’esaurimento e le reti di segnalazione immunitaria specifiche di linea cellulare.

SLAMF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLAMF6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLAMF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLAMF6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLAMF6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLAMF6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLAMF6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLAMF6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLAMF6 nelle cellule tumorali con espressione di SLAMF6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.