Six1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402063-ACT

SIX1 codifica Six1, un fattore di trascrizione homeobox che regola i programmi di sviluppo embrionale, inclusi l’organogenesi, la miogenesi e la formazione delle placode sensoriali, coordinando reti di espressione genica specifiche di linea cellulare. Six1 agisce all’interno di circuiti di regolazione trascrizionale che interagiscono con vie di segnalazione dello sviluppo come WNT, FGF e TGF-β, influenzando le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione. Nei tessuti adulti, una disregolazione dell’espressione di SIX1 può promuovere stati trascrizionali aberranti associati alla transizione epitelio-mesenchimale, a programmi legati all’invasività e ad alterazioni del controllo del ciclo cellulare. Di conseguenza, SIX1 è ampiamente studiato come fattore trainante della riattivazione di geni dello sviluppo in oncologia e come determinante di fenotipi di differenziazione specifici di tessuto.

Six1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SIX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Six1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SIX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SIX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Six1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SIX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Six1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Six1 nelle cellule tumorali con espressione di SIX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.