SIRT3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400675-NIC

SIRT3 codifica una deacetilasi mitocondriale NAD⁺-dipendente che regola l’acetilazione delle proteine per coordinare il metabolismo ossidativo, l’equilibrio redox e il controllo di qualità mitocondriale. Deacetilando bersagli coinvolti nel ciclo dell’acido citrico (TCA), nella β-ossidazione degli acidi grassi e nelle difese antiossidanti, SIRT3 influenza la produzione di ATP, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e le vie di adattamento allo stress. L’attività di SIRT3 interseca programmi di sensing dei nutrienti e di omeostasi mitocondriale, inclusi il rimodellamento metabolico legato ad AMPK e PGC-1α e processi associati alla mitofagia. Una deacetilazione dipendente da SIRT3 deregolata è stata associata a un’alterata funzione mitocondriale osservata in disturbi metabolici, neurodegenerazione, risposte cardiovascolari allo stress e rimodellamento metabolico correlato al cancro, a supporto della sua ampia rilevanza nella biologia delle malattie.

SIRT3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SIRT3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SIRT3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SIRT3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SIRT3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.