SIK2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406982-ACT

La chinasi 2 inducibile dal sale (SIK2) è una chinasi serina/treonina della famiglia delle chinasi correlate ad AMPK che coordina il rilevamento dell’energia cellulare con programmi trascrizionali. SIK2 regola il controllo dipendente dalla fosforilazione dei coattivatori di CREB (CRTC) e delle HDAC di classe IIa, influenzando così la segnalazione cAMP/CREB, l’espressione dei geni metabolici e le vie di risposta allo stress. Nelle cellule umane, l’attività di SIK2 è stata collegata alla differenziazione degli adipociti e all’omeostasi di lipidi e glucosio, e contribuisce anche alla progressione del ciclo cellulare e alla dinamica del citoscheletro tramite la modulazione di reti di segnalazione chinasi. L’espressione o la segnalazione di SIK2 deregolate sono oggetto di studio in ambito oncologico e in modelli di malattie metaboliche, dove l’alterato controllo trascrizionale e le vie associate alla proliferazione rappresentano i principali indicatori meccanicistici.

SIK2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SIK2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SIK2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SIK2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SIK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SIK2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SIK2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SIK2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SIK2 nelle cellule tumorali con espressione di SIK2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.