SHIP-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400619-NIC

INPP5D codifica SHIP-1 (Src homology 2 domain-containing inositol 5-phosphatase 1), una fosfatasi lipidica arricchita nelle cellule ematopoietiche che converte PI(3,4,5)P3 in PI(3,4)P2, limitando così ampiezza e durata della segnalazione PI3K–AKT. Attraverso interazioni con recettori immunitari fosforilati e proteine adattatrici, SHIP-1 modula la segnalazione del recettore Fc e del BCR, le risposte alle citochine, la chemiotassi e i programmi di sopravvivenza nelle cellule mieloidi e linfoidi. Questo nodo regolatorio influenza l’omeostasi dell’immunità innata e adattativa e si interseca con vie che governano la segnalazione infiammatoria e le decisioni sul destino cellulare. Un’attività disregolata di INPP5D/SHIP-1 è stata collegata a disfunzioni immunitarie e a contesti di segnalazione oncogenica nella ricerca sulle malattie ematologiche, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione della via PI3K.

SHIP-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus INPP5D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di INPP5D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di INPP5D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con INPP5D interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.