SerpinB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402083-NIC

SERPINB1 codifica SerpinB1, un inibitore intracellulare delle proteasi seriniche che limita l’attività delle proteasi derivate dai neutrofili, come l’elastasi e la catepsina G, riducendo così lo stress proteolitico e sostenendo l’omeostasi tissutale. SerpinB1 contribuisce alla regolazione della segnalazione infiammatoria, della sopravvivenza dei leucociti e dell’integrità della barriera epiteliale modulando vie dipendenti dalle proteasi, collegate allo stress ossidativo e alla morte cellulare. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SERPINB1 sono state associate a risposte immunitarie innate disregolate e a uno squilibrio tra proteasi e inibitori in contesti infiammatori delle vie aeree e della cute; inoltre, viene utilizzato come marcatore in studi sugli stati delle cellule mieloidi. Queste caratteristiche rendono SERPINB1 un bersaglio utile per analizzare le reti proteasi-inibitore, la biologia dei neutrofili e i meccanismi di rimodellamento associati all’infiammazione in modelli cellulari umani.

SerpinB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SERPINB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SERPINB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SERPINB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SERPINB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.