Septin 2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403840-NIC

SEPT2 codifica la septina 2, una proteina citoscheletrica legante il GTP che polimerizza in filamenti di septine etero-oligomerici e in strutture ad anello che agiscono da barriere di diffusione e da impalcature (scaffold) alla corteccia cellulare. La septina 2 coordina la citocinesi, la polarità cellulare, il traffico vescicolare e l’organizzazione di microtubuli/actina, collegando il rimodellamento di membrana alla progressione del ciclo cellulare. Interagisce con vie che regolano l’abscissione e la dinamica del citoscheletro, e alterazioni nell’assemblaggio delle septine sono state associate ad aneuploidia, comportamento cellulare invasivo e disorganizzazione dell’architettura epiteliale. Una disregolazione dell’espressione o della localizzazione di SEPT2 è stata inoltre riportata in contesti neurodegenerativi e oncologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per studiare il controllo citoscheletrico della proliferazione e dell’organizzazione tissutale.

Septin 2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SEPT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SEPT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SEPT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SEPT2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.