SENP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402148-ACT

Il gene umano **SENP2** codifica una proteasi specifica per SUMO che inverte la SUMOilazione processando i precursori di SUMO e deconiugando SUMO dalle proteine bersaglio, modulando così stabilità, localizzazione e attività proteica. Attraverso il controllo dinamico della segnalazione dipendente da SUMO, SENP2 influenza la regolazione trascrizionale, le risposte al danno al DNA, la progressione del ciclo cellulare e vie di adattamento allo stress, inclusa l’interazione con la proteostasi mediata da ubiquitina. Alterazioni dell’omeostasi di SUMO e una deregolazione dell’attività di SENP2 sono state associate a cambiamenti nella segnalazione infiammatoria, nel mantenimento del genoma e in programmi oncogenici, a supporto della sua rilevanza negli studi di biologia del cancro e di fenotipi cellulari correlati. SENP2 è inoltre utilizzato come nodo per interrogare il flusso della via di SUMO e la regolazione specifica dei substrati in diversi modelli cellulari umani.

SENP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SENP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SENP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SENP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SENP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SENP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SENP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SENP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SENP2 nelle cellule tumorali con espressione di SENP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.