SEC16A Double Nickaseプラスミド (m): sc-432718-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SEC16A Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SEC16Aダブルニカースプラスミド（m）およびSEC16Aダブルニカースプラスミド（m2）は、Sec16aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SEC16A Double Nickaseプラスミド (m) | sc-432718-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEC16A Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-432718-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sec16a は、ER（小胞体）出口部位の中核的な足場タンパク質である SEC16A をコードしており、COPII コートの組み立てを組織化して ER からゴルジ体への輸送を開始します。SEC16A は、SEC23/SEC24 および SEC13/SEC31 のリクルートと動態を協調的に制御することで、分泌経路のフラックスと輸送担体の生合成を調節し、膜輸送、オルガネラ恒常性、プロテオスタシスを支えます。初期分泌輸送の変調は、脂質代謝、細胞外マトリックス分泌、受容体提示といった過程を乱し得て、これらはストレス適応や細胞状態の移行に関連します。そのため SEC16A は、マウスモデルにおいて、ER の構造・組織化とオートファジー、小胞体ストレス／アンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル、ならびに輸送依存的な細胞増殖・分化制御を結び付ける経路の一部として研究されています。
SEC16A ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Sec16a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Sec16a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Sec16aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Sec16aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。