SEC16A Plasmide Double Nickase (m): sc-432718-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SEC16A Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SEC16A Double Nickase Plasmid (m) e il SEC16A Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sec16a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SEC16A Plasmide Double Nickase (m) | sc-432718-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEC16A Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432718-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sec16a codifica SEC16A, una proteina impalcatura fondamentale dei siti di uscita dal reticolo endoplasmatico, che organizza l’assemblaggio del rivestimento COPII per avviare il trasporto dal RE all’apparato di Golgi. Coordinando il reclutamento e la dinamica di SEC23/SEC24 e SEC13/SEC31, SEC16A regola il flusso della via secretoria e la biogenesi dei vettori di trasporto che sostengono il traffico di membrana, l’omeostasi degli organelli e la proteostasi. Alterazioni del traffico secretorio precoce possono perturbare il metabolismo lipidico, la secrezione della matrice extracellulare e la presentazione dei recettori, processi rilevanti per l’adattamento allo stress e le transizioni di stato cellulare. SEC16A è quindi studiata in vie che collegano l’organizzazione del RE all’autofagia, alla segnalazione della risposta alle proteine non correttamente ripiegate (UPR) e alla regolazione, dipendente dal traffico, della crescita e della differenziazione cellulare in modelli murini.
SEC16A Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sec16a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sec16a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sec16a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sec16a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.