RP105 Plasmide Double Nickase (h): sc-409643-NIC

Il gene umano **CD180** codifica **RP105**, un membro della famiglia dei recettori Toll-like che forma un complesso con **MD-1** e funge da componente regolatoria della segnalazione immunitaria innata nelle cellule B e nelle cellule presentanti l’antigene. RP105 modula le risposte al lipopolisaccaride e ad altri segnali microbici, influenzando l’attività a valle delle vie **NF-κB** e **MAPK**, con effetti sulla produzione di citochine, sulla proliferazione e sulla sopravvivenza cellulare. Grazie al suo ruolo nel controllo delle soglie di segnalazione associate a **TLR4** e degli stati di attivazione delle cellule B, CD180 è rilevante per studi sulla regolazione dell’infiammazione e sulla disregolazione immunitaria osservata nell’autoimmunità, nella biologia delle infezioni e nei contesti di neoplasie guidate dalle cellule B. Alterazioni dell’espressione di RP105 e dell’equilibrio della sua segnalazione sono state associate ad attivazione immunitaria aberrante e a cambiamenti nelle risposte immunitarie umorali, rendendolo un nodo utile per l’analisi meccanicistica del dialogo tra immunità innata e adattativa.

RP105 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD180 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD180. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD180. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD180 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.