RNF123 Plasmide Double Nickase (h): sc-403631-NIC

RNF123 codifica una ligasi E3 ubiquitina-proteina che regola il turnover proteico tramite la degradazione proteasomiale dipendente dall’ubiquitina e coordina il riconoscimento dei substrati all’interno delle reti di segnalazione dell’ubiquitina. Controllando la stabilità di specifiche proteine regolatorie, RNF123 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress cellulare e vie legate alla proteostasi e alla trasduzione del segnale. Un’alterazione dell’attività delle ligasi dell’ubiquitina può rimodellare i programmi trascrizionali e il controllo dei checkpoint, rendendo RNF123 un nodo rilevante per studi meccanicistici sulla crescita disregolata e sulla sorveglianza del genoma. Sono state riportate alterazioni dell’espressione o della funzione di RNF123 in contesti di biologia delle malattie umane in cui è compromesso il controllo dell’omeostasi proteica mediato dall’ubiquitinazione.

RNF123 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF123 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF123. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF123. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF123 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.