Plásmido CRISPR de Activación (h) RIP3: sc-401008-ACT

El gen humano **RIPK3** codifica la quinasa de serina/treonina 3 que interactúa con receptores (RIP3), un mediador central de la necrosis programada (necroptosis) y de la muerte celular inflamatoria. RIP3 integra señales aguas arriba provenientes de receptores de muerte y de vías de la inmunidad innata para activar la disrupción de la membrana impulsada por MLKL, a la vez que se interseca con la señalización de NF-κB, la comunicación cruzada con el inflamasoma y las respuestas al estrés metabólico. La actividad desregulada de RIPK3 se asocia con inflamación aberrante y mecanismos de daño tisular implicados en la neurodegeneración, el daño por isquemia-reperfusión, la inmunopatología asociada a infecciones y la biología del cáncer. Como nodo de la vía, RIP3 se estudia con frecuencia para dilucidar cambios dependientes del contexto entre apoptosis, necroptosis y señalización prosupervivencia.

RIP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RIPK3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RIP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RIPK3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RIPK3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RIP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RIPK3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RIP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RIP3 en células tumorales con expresión de RIPK3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.