RING1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405198-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RING1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RING1 Double Nickase Plasmid (h) e il RING1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RING1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RING1 Antibody (8C12F4): sc-517221
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RING1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405198-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RING1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405198-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RING1 codifica la proteina RING finger 1, un componente catalitico centrale del complesso repressivo Polycomb 1 (PRC1) che media la monoubiquitinazione dell’istone H2A in corrispondenza della Lys119 e promuove la compattazione della cromatina. Attraverso il silenziamento epigenetico dipendente da PRC1, RING1 contribuisce a controllare i programmi genici dello sviluppo, l’impegno di linea e il mantenimento della repressione trascrizionale nei loci bersaglio di Polycomb. RING1 interagisce con le reti di segnalazione Polycomb e si coordina con la trimetilazione di H3K27 guidata da PRC2 per stabilizzare stati di cromatina repressivi. Un’attività deregolata di RING1/PRC1 è implicata in programmi trascrizionali aberranti osservati nel cancro e nei disturbi dello sviluppo, a supporto del suo impiego negli studi sulla regolazione della cromatina e sull’epigenetica associata alle malattie.
RING1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RING1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RING1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RING1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RING1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.