Ribosomal Protein S16 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403364-ACT

RPS16 codifica la proteina ribosomiale umana S16, un componente conservato della piccola subunità ribosomiale 40S, necessario per un’accurata decodifica dell’mRNA e per un’avvio efficiente della traduzione. Nell’ambito della biogenesi dei ribosomi e della sintesi proteica citoplasmatica, RPS16 sostiene programmi di crescita cellulare e vie di proteostasi che collegano la segnalazione nutrizionale all’output traduttivo. Alterazioni nel dosaggio e nell’assemblaggio delle proteine ribosomiali possono innescare risposte di stress nucleolare e rimodellare reti trascrizionali legate a p53, connettendo l’integrità del ribosoma al controllo del ciclo cellulare. Un’espressione aberrante delle proteine ribosomiali, inclusa RPS16, è stata riportata in molteplici contesti patologici ed è spesso esaminata come marcatore di una capacità traduttiva alterata in stati proliferativi e adattati allo stress.

Ribosomal Protein S16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RPS16 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ribosomal Protein S16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RPS16 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RPS16, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ribosomal Protein S16. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RPS16 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ribosomal Protein S16 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ribosomal Protein S16 nelle cellule tumorali con espressione di RPS16 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.