Ribosomal Protein L24 Plasmide Double Nickase (h): sc-417652-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ribosomal Protein L24 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ribosomal Protein L24 Double Nickase Plasmid (h) e il Ribosomal Protein L24 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RPL24. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ribosomal Protein L24 Antibody (C-5): sc-518250
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ribosomal Protein L24 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417652-NIC | 20 µg | $410.00 |
RPL24 codifica la proteina ribosomiale L24, un componente essenziale della grande subunità ribosomiale 60S che contribuisce all’assemblaggio del ribosoma e al controllo della traduzione. Sostenendo la capacità di decodifica dell’mRNA e la sintesi dei polipeptidi nascenti, RPL24 influenza processi fondamentali quali la crescita cellulare, la proteostasi e programmi di traduzione adattativi allo stress. L’alterazione delle proteine ribosomiali può indurre stress nucleolare e attivare vie di sorveglianza, incluso il segnale di p53, collegando i difetti della biogenesi ribosomiale a una regolazione alterata del ciclo cellulare. La produzione e la traduzione ribosomiale deregolate sono ampiamente implicate nella trasformazione oncogena e in fenotipi simili alle ribosomopatie, rendendo RPL24 un nodo rilevante per studi meccanicistici del controllo della traduzione nelle cellule umane.
Ribosomal Protein L24 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RPL24 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RPL24. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RPL24. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RPL24 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.