Rho 8 Plasmide Double Nickase (h): sc-403363-NIC

RND3 codifica Rho 8 (nota anche come RhoE), una GTPasi atipica della famiglia Rho che modula l’organizzazione del citoscheletro di actina e la contrattilità cellulare, in larga parte antagonizzando la segnalazione RHOA–ROCK. Influenzando la formazione delle fibre di stress, la dinamica delle adesioni focali e la fosforilazione della catena leggera della miosina, Rho 8 contribuisce alla regolazione della migrazione cellulare, dell’estensione dei neuriti e della progressione del ciclo cellulare. L’attività di RND3 interseca vie che controllano adesione e sopravvivenza, incluse le risposte ai fattori di crescita e allo stress cellulare. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di RND3 sono state associate a fenotipi rilevanti per l’invasione delle cellule tumorali, il rimodellamento cardiovascolare e i processi di neurosviluppo, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sulla regolazione citoscheletrica e trascrizionale.

Rho 8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RND3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RND3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RND3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RND3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.