RGMa Plasmide Double Nickase (m): sc-434035-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RGMa Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RGMa Double Nickase Plasmid (m) e il RGMa Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Rgma. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RGMa Plasmide Double Nickase (m) | sc-434035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RGMa Plasmide Double Nickase (m2) | sc-434035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Rgma codifica la molecola guida repulsiva A (RGMa), una proteina di membrana ancorata tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che agisce come segnale di guida assonale e come modulatore della dinamica del cono di crescita neuronale. RGMa interagisce con recettori quali la neogenina e influenza la segnalazione a valle, che converge sul rimodellamento del citoscheletro, sull’inibizione della crescita dei neuriti e sui programmi di connettività neuronale. Partecipa inoltre alla modulazione della via BMP e può plasmare risposte cellulari rilevanti per lo sviluppo, la rigenerazione e le interazioni immuno-neurali. Una segnalazione RGMa deregolata è stata associata a contesti neuroinfiammatori e neurodegenerativi, rendendo Rgma un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla formazione dei circuiti e sulle risposte al danno nel sistema nervoso del topo.
RGMa Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rgma nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rgma. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rgma. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rgma interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.