Rfp2 Plasmide Double Nickase (m): sc-426099-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rfp2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rfp2 Double Nickase Plasmid (m) e il Rfp2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Trim13. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rfp2 Antibody (A-2): sc-398129
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rfp2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-426099-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Trim13 codifica la proteina RING finger Rfp2, una ligasi E3 dell’ubiquitina che contribuisce a regolare il controllo qualità delle proteine e la trasduzione del segnale promuovendo il turnover, dipendente dall’ubiquitina, di specifici substrati. Rfp2 è stata collegata a processi associati al reticolo endoplasmatico e a vie sensibili allo stress, influenzando decisioni cellulari quali sopravvivenza, proliferazione e segnalazione dell’immunità innata. Modellando la proteostasi e l’abbondanza di recettori/adattatori, Trim13 può influenzare, in modo dipendente dal contesto, vie a valle tra cui NF-κB e altre reti infiammatorie. Alterazioni dell’attività delle ligasi dell’ubiquitina della famiglia TRIM sono state associate a disregolazione immunitaria e fenotipi correlati al cancro, rendendo Trim13 un nodo utile per studi meccanicistici in modelli murini e in sistemi cellulari.
Rfp2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trim13 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trim13. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trim13. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trim13 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.