Renin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400890-ACT

Il gene umano **REN** codifica la renina, una proteasi aspartica che avvia il sistema renina–angiotensina–aldosterone scindendo l’angiotensinogeno e generando angiotensina I, regolando così la produzione di angiotensina II e la segnalazione a valle che controlla il tono vascolare e l’equilibrio elettrolitico. L’attività della renina è integrata con circuiti di feedback endocrini che coinvolgono l’aldosterone, la segnalazione simpatica e la gestione renale del sodio, collegando la fisiologia renale all’emodinamica sistemica. Una deregolazione dell’espressione di **REN** o l’attivazione della via della renina è implicata nell’ipertensione, nel rimodellamento cardiovascolare e nella fisiopatologia associata alla malattia renale cronica. In quanto enzima secreto prodotto principalmente dalle cellule iuxtaglomerulari, la renina rappresenta anche un nodo sperimentalmente accessibile per studiare l’accoppiamento stimolo-secrezione e il controllo trascrizionale in modelli cellulari renali e vascolari.

Renin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di REN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Renin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus REN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione REN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Renin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus REN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Renin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Renin nelle cellule tumorali con espressione di REN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.