RelB Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422643-ACT

Relb codifica RelB, un membro della famiglia NF-κB/Rel che agisce come fattore di trascrizione centrale nella via non canonica di NF-κB. RelB forma comunemente eterodimeri con p52 per regolare programmi genici che controllano la differenziazione delle cellule immunitarie, la presentazione dell’antigene, l’organogenesi degli organi linfoidi e la segnalazione infiammatoria a valle di recettori quali BAFFR, CD40 e il recettore della linfotossina-β. Nei sistemi murini, l’attività di RelB influenza la maturazione delle cellule dendritiche e il dialogo tra stroma e comparto immunitario, modellando reti di citochine e chemochine che coordinano l’omeostasi tissutale. Una trascrizione dipendente da RelB deregolata è stata implicata in un’attivazione immunitaria aberrante e in stati infiammatori cronici, rendendo Relb un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione e delle reti trascrizionali.

RelB Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Relb senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RelB Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Relb nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Relb, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RelB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Relb nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RelB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RelB nelle cellule tumorali con espressione di Relb silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.