Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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RBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431972-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- RBP2 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal RBP2 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal RBP2 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Kdm5a. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RBP2 Antibody (G-12): sc-365993
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-431972-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
RBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-431972-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino **Kdm5a** codifica per **RBP2**, una demetilasi istonica della famiglia **JARID1** che rimuove i segni **H3K4me3/2** per regolare l’attività di promotori ed enhancer. Modulando l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale, RBP2 contribuisce a coordinare la specificazione di linea, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di differenziamento, e può interagire con le reti trascrizionali core e con complessi di rimodellamento della cromatina. Un’attività deregolata di Kdm5a/RBP2 è stata associata a stati epigenetici aberranti collegati a programmi trascrizionali oncogenici e a fenotipi neuroevolutivi, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo epigenetico dell’espressione genica. Nei sistemi modello murini, la manipolazione di Kdm5a supporta studi meccanicistici sulla regolazione di vie guidata dalla cromatina, inclusi l’equilibrio tra repressione/attivazione trascrizionale e i programmi genici responsivi allo stress.
RBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Kdm5a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
RBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Kdm5a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Kdm5a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RBP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Kdm5a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RBP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RBP2 nelle cellule tumorali con espressione di Kdm5a silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.