RANTES CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401806-ACT

CCL5はケモカインRANTESをコードしており、CCR1、CCR3、CCR5に対する分泌性リガンドとして、炎症応答時の白血球の動員、接着、活性化を協調的に制御します。RANTESのシグナル伝達はGPCR依存性カスケードを介して作動し、走化性、インテグリン活性化、カルシウムフラックス、さらに下流のMAPKおよびPI3K経路と交差しながら、組織内での免疫細胞のトラフィッキングを形作ります。CCL5発現の破綻は、慢性的な炎症性微小環境や免疫監視の変化と関連しており、自己免疫、感染に伴う免疫動態、腫瘍―免疫相互作用の研究において重要です。ヒトの実験系では、CCL5/RANTESはしばしば、骨髄系細胞とT細胞のコミュニケーション、サイトカインネットワーク、ストローマ―免疫クロストークの文脈で解析されます。

RANTES CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCL5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RANTES CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCL5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCL5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RANTESの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCL5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRANTES依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCL5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRANTES経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。