RANKL Plasmide Double Nickase (h): sc-400304-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RANKL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RANKL Double Nickase Plasmid (h) e il RANKL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TNFSF11. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RANKL Antibody (G-1): sc-377079
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RANKL Plasmide Double Nickase (h) | sc-400304-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RANKL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400304-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFSF11 codifica il ligando del recettore attivatore di NF-κB (RANKL), una citochina della superfamiglia del TNF presente sia come proteina transmembrana di tipo II sia in forma solubile, che segnala attraverso TNFRSF11A/RANK per regolare la differenziazione, l’attivazione e la sopravvivenza degli osteoclasti. Il legame RANKL–RANK attiva la segnalazione NF-κB canonica e non canonica, oltre a programmi trascrizionali guidati da MAPK e NFATc1, coordinando il rimodellamento osseo e l’interazione con la funzione delle cellule immunitarie. Una segnalazione RANKL deregolata è fortemente associata a osteolisi infiammatoria e a processi di perdita ossea, inclusi l’osteoporosi e l’erosione articolare legata all’artrite reumatoide, e contribuisce a microambienti osteolitici associati ai tumori. Poiché RANKL modella anche le interazioni tra cellule dendritiche e linfociti T e il rimodellamento specifico dei tessuti, TNFSF11 è ampiamente studiato nei modelli di osteoimmunologia e biologia scheletrica.
RANKL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNFSF11 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNFSF11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNFSF11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNFSF11 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.