Rad18 Plasmide Double Nickase (h): sc-406099-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rad18 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rad18 Double Nickase Plasmid (h) e il Rad18 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAD18. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rad18 Antibody (79B1048): sc-52949
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rad18 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406099-NIC | 20 µg | $410.00 |
RAD18 umano codifica Rad18, una ligasi E3 dell’ubiquitina che coordina la tolleranza al danno del DNA post-replicativo associandosi all’enzima E2 RAD6 per monoubiquitinare PCNA e promuovere la sintesi translesione e il template switching. Attraverso questa via centrata su PCNA, Rad18 contribuisce a riavviare le forcelle di replicazione bloccate e limita l’instabilità genomica associata alla replicazione in seguito a UV e ad altri stress genotossici. RAD18 interagisce con reti più ampie di riparazione del DNA e di risposta allo stress replicativo, influenzando i tassi di mutagenesi, la stabilità cromosomica e la sensibilità cellulare ad agenti che danneggiano il DNA. La disregolazione di RAD18 è stata associata a una capacità alterata di tolleranza al danno del DNA e a fenotipi di instabilità genomica frequentemente studiati nella biologia del cancro e in modelli di disordini ereditari della riparazione del DNA.
Rad18 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAD18 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAD18. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAD18. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAD18 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.