QKI Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405082-ACT

QKI (Quaking) è una proteina legante l’RNA che regola l’espressione genica post-trascrizionale controllando lo splicing del pre-mRNA, la stabilizzazione dell’mRNA, l’esportazione e la traduzione. È un modulatore chiave dei programmi di destino cellulare, con ruoli di primo piano nella differenziazione degli oligodendrociti e nella mielinizzazione, e coordina regoloni di RNA coinvolti nell’organizzazione del citoscheletro e nella trasduzione del segnale. QKI interagisce con vie che governano le dinamiche epitelio–mesenchimali, l’apoptosi e le risposte allo stress, modellando l’utilizzo delle isoforme trascrittomiche e il turnover dell’RNA. Un’espressione o uno splicing di QKI deregolati sono stati associati a fenotipi di neurosviluppo e demielinizzazione e vengono spesso studiati nel contesto della biologia del cancro, dove un processamento dell’RNA alterato contribuisce a proliferazione e invasività aberranti.

QKI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di QKI senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

QKI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus QKI nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione QKI, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di QKI. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus QKI nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da QKI nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via QKI nelle cellule tumorali con espressione di QKI silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.