QIP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405442-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- QIP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il QIP1 Double Nickase Plasmid (h) e il QIP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KPNA4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: QIP1 Antibody (3D10): sc-101547
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
QIP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405442-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
QIP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KPNA4 codifica la carioferina subunità alfa 4 (QIP1), un adattatore della famiglia importina-α che riconosce i segnali di localizzazione nucleare classici e recluta importina-β per mediare la traslocazione proteica attraverso il complesso del poro nucleare. Controllando il traffico nucleo-citoplasmatico, KPNA4 modella i programmi trascrizionali, la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione in risposta allo stress regolando l’accesso al nucleo di fattori di trascrizione chiave e proteine regolatorie. Dinamiche alterate di importazione nucleare che coinvolgono KPNA4 sono state collegate, in contesti rilevanti per il cancro, a una proliferazione e invasività deregolate e a vie di mantenimento del genoma, e possono influenzare le risposte cellulari al danno al DNA e a stimoli infiammatori. In quanto nodo centrale del trasporto nucleare, KPNA4 viene spesso studiata per chiarire l’architettura delle vie di segnalazione che dipendono da una localizzazione nucleare regolata.
QIP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KPNA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KPNA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KPNA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KPNA4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.