PYPAF7 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-436175-LAC

Il gene murino **Nlrp12** codifica **PYPAF7**, un recettore di tipo NOD che funziona come sensore citosolico dell’immunità innata e regolatore della segnalazione infiammatoria. PYPAF7 partecipa a processi associati all’inflammasoma ed è ampiamente implicato nella modulazione degli output delle vie **NF-κB** e **MAPK**, contribuendo così a definire i programmi di citochine e chemochine a valle della stimolazione dei recettori di riconoscimento dei pattern. Attraverso i suoi ruoli nell’attivazione delle cellule mieloidi e nell’omeostasi immunitaria mucosale, **Nlrp12** è stato collegato alla suscettibilità a disturbi infiammatori e alle risposte dell’ospite a segnali microbici in modelli di colite e di infezione. Queste proprietà rendono **Nlrp12** un bersaglio utile per analizzare i checkpoint che limitano un’infiammazione eccessiva e per mappare il crosstalk delle reti dell’immunità innata nelle cellule murine.

Le particelle di attivazione lentivirale PYPAF7 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Nlrp12 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PYPAF7 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Nlrp12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PYPAF7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Nlrp12 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.