PTPσ Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422531-ACT

Il gene murino *Ptprs* codifica la fosfatasi tirosinica proteica sigma (PTPσ), una fosfatasi di tipo recettoriale arricchita in contesti neurali ed epiteliali che integra i segnali della matrice extracellulare con eventi intracellulari di defosforilazione, modulando l’adesione cellulare, la crescita dei neuriti, la guida assonale e l’organizzazione sinaptica. PTPσ interagisce con proteoglicani a eparan solfato e a condroitin solfato, collegando la matrice pericellulare al rimodellamento del citoscheletro e a moduli di segnalazione che influenzano il comportamento del cono di crescita e la plasticità dei circuiti. Attraverso la modulazione di vie dipendenti dalla fosforilazione, *Ptprs* contribuisce alla segnalazione dipendente dal contatto e al patterning tissutale; nella letteratura, un’alterata attività di PTPσ è stata associata a fenotipi neuroevolutivi, a una rigenerazione compromessa e a una comunicazione cellula–cellula deregolata. Queste caratteristiche rendono *Ptprs* un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione controllata da fosfatasi nella connettività neuronale e nella regolazione del microambiente.

PTPσ Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ptprs senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PTPσ Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ptprs nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ptprs, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PTPσ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ptprs nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PTPσ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PTPσ nelle cellule tumorali con espressione di Ptprs silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.