PSMD1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-427651-LAC

Il gene murino **Psmd1** codifica **PSMD1 (Rpn2)**, una subunità essenziale non ATPasica della particella regolatoria **19S** del proteasoma **26S**, che funge da impalcatura per l’assemblaggio e supporta il riconoscimento e la processazione dei substrati durante la proteolisi dipendente dall’ubiquitina. Attraverso il sistema ubiquitina–proteasoma, PSMD1 contribuisce al controllo di qualità delle proteine, alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno del DNA e alla regolazione di vie di segnalazione, inclusa **NF-κB**, tramite il turnover di **IκB**. L’alterazione dei componenti regolatori del proteasoma può compromettere la proteostasi, modificare programmi trascrizionali adattativi allo stress e influenzare la processazione degli antigeni, collegando la biologia di PSMD1 a meccanismi rilevanti per neurodegenerazione, infiammazione e trasformazione oncogena. Nei modelli murini, la modulazione di **Psmd1** offre un approccio praticabile per studiare l’architettura regolatoria del proteasoma e le conseguenze a valle sull’omeostasi cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale PSMD1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Psmd1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PSMD1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Psmd1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PSMD1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Psmd1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.