PRMT7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417516-ACT

PRMT7 (protein arginine methyltransferase 7) è una PRMT di tipo III che catalizza la monometilazione dei residui di arginina sugli istoni e su substrati non istonici, modulando l’accessibilità della cromatina e le interazioni proteina–proteina. Attraverso la regolazione di programmi trascrizionali, processi associati all’RNA e risposte allo stress cellulare, PRMT7 contribuisce al controllo della proliferazione, della differenziazione e della segnalazione correlata al danno al DNA. Un’attività alterata di PRMT7 è stata associata a stati epigenetici deregolati e al rimodellamento di vie di segnalazione osservati in molteplici contesti patologici, inclusa la riprogrammazione trascrizionale associata al cancro. In quanto metiltransferasi che interagisce con la cromatina e con reti regolatorie, PRMT7 è spesso studiata nei meccanismi di controllo dell’espressione genica e nei fenotipi dipendenti dall’epigenoma.

PRMT7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRMT7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRMT7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRMT7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRMT7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRMT7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRMT7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRMT7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRMT7 nelle cellule tumorali con espressione di PRMT7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.