PRMT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402249-NIC

PRMT1 codifica la protein arginine methyltransferase 1, la principale PRMT di tipo I responsabile della dimetilazione asimmetrica dei residui di arginina sugli istoni e su numerose proteine leganti l’RNA e proteine coinvolte nella segnalazione. Attraverso la regolazione dell’accessibilità della cromatina, della trascrizione, del processamento dell’RNA e delle risposte al danno al DNA, PRMT1 contribuisce a processi fondamentali quali il controllo del ciclo cellulare, l’apoptosi e la differenziazione. La metilazione dipendente da PRMT1 si interfaccia con le vie epigenetiche e di risposta allo stress modulando le interazioni proteina–proteina e la localizzazione subcellulare di regolatori chiave. Un’attività di PRMT1 deregolata e alterati pattern di metilazione dell’arginina sono spesso oggetto di studio in relazione a programmi trascrizionali oncogeni, infiammazione e meccanismi delle malattie neurodegenerative.

PRMT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRMT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRMT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRMT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRMT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.