PRK2 Plasmide Double Nickase (h): sc-407649-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PRK2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PRK2 Double Nickase Plasmid (h) e il PRK2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PKN2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PRK2 Antibody (A-3): sc-271971
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PRK2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407649-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRK2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407649-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PKN2 codifica la protein chinasi N2 (PRK2), una chinasi serina/treonina che agisce come effettore delle GTPasi della famiglia Rho per coordinare il rimodellamento del citoscheletro, la contrattilità actina–miosina e la dinamica dell’adesione cellulare. PRK2 contribuisce a moduli di segnalazione che intersecano l’organizzazione delle adesioni focali e delle fibre da stress, influenzando i cambiamenti di forma cellulare, la migrazione e la citocinesi. Attraverso la regolazione di eventi di fosforilazione in queste vie, alterazioni dell’attività o dell’espressione di PRK2 sono studiate in contesti di motilità aberrante, fenotipi invasivi e segnalazione di crescita deregolata rilevanti per il cancro e la biologia vascolare. PRK2 è inoltre oggetto di studio per il suo ruolo nelle risposte allo stress cellulare e nel “crosstalk” tra reti di chinasi che modellano i programmi di proliferazione e sopravvivenza.
PRK2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PKN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PKN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PKN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PKN2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.