PRDM15 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404932-ACT

PRDM15 (PR/SET domain 15) codifica un regolatore nucleare associato alla cromatina, implicato nel controllo trascrizionale attraverso la modulazione degli stati della cromatina e dell’attività dei promotori. In quanto membro della famiglia PRDM, PRDM15 è collegato a programmi di specificazione di linea e al mantenimento dell’identità cellulare coordinando reti di espressione genica che influenzano proliferazione e differenziamento. La regolazione dipendente da PRDM15 interseca vie epigenetiche che modellano circuiti trascrizionali dello sviluppo e può incidere su programmi metabolici e di segnalazione. Un’espressione o un’attività deregolata di PRDM15 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi trascrizionale in contesti rilevanti per il cancro, motivandone lo studio nella trascrizione oncogenica, negli stati con caratteristiche staminali e nella mappatura delle vulnerabilità epigenetiche.

PRDM15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRDM15 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRDM15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRDM15 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRDM15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRDM15. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRDM15 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRDM15 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRDM15 nelle cellule tumorali con espressione di PRDM15 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.